NLRP3炎性因子可通过DAMPs、PAMPs激活ATP和MSU。而TA对ATP和MSU激活caspase-1和分泌IL-1β有明显的抑制作用。经TA处理后，细胞溶质LPS诱导的BMDM中非标准NLRP3激活也可被抑制(Fig.2)。可以得出，TA是NLRP3炎症因子的潜在抑制剂。
TA对尼日利亚霉素诱导的线粒体凋亡几乎没有影响。此外，TA对NLRP3炎症因子激活而导致的钾、氯离子流动没有影响。作为NLRP3炎症小体组装的一个基本步骤，作者接下来检查TA可能影响NLRP3-ASC的相互作用。免疫沉淀结果显示，TA抑制了LPS诱导的BMDM和THP1细胞中尼日利亚霉素诱导的NLRP3和ASC之间的相互作用。这些结果表明TA可能通过阻断NLRP3-ASC复合物的形成而抑制NLRP3炎症因子的激活。(Fig.3)
随后，作者对TA直接与NLRP3结合方式进行研究。结果表明，TA介导的NLRP3炎症因子激活的抑制是不可逆的，BLI分析也证实这点。通过破坏α，β-不饱和酮部分，使用TA-13进行BLI分析结果表明TA-13和NLRP3之间没有明显的直接相互作用。质谱结果证明，TA通过结合NLRP3的NACHT结构域的Cys直接靶向NLRP3。(Fig.4)
通过结肠炎造模，作者团队对TA进行体内分析。结果显示TA以剂量依赖的方式预防结肠缩短，经过TA治疗后，DSS诱导的结肠炎小鼠体重减轻现象明显改善，观察DSS诱导的结肠炎中上皮组织，可以看到，TA能改善炎症细胞浸润。而因为炎症细胞浸润而导致脾肿大现象减少。(Fig.5)TA处理的小鼠结肠中的MPO水平远低于DSS组。此外，TA处理的结肠组织中F4/80阳性细胞减少，典型的紧密连接蛋白claudin-1的表达增加。这些数据表明TA可以减轻炎症细胞浸润。更可喜的是TA不会引起小鼠器官的明显形态学变化，表明TA对小鼠的*性较低。(Fig.5)进一步实验表明，TA治疗可改善WT小鼠结肠局部坏死、水肿和缩短，而对Nlrp3-/-小鼠无明显影响，证明TA介导的DSS诱导的实验性结肠炎的缓解依赖于NLRP3。(Fig.6)
综上所述，该研究表明TA是一种新的NLRP3抑制剂，其将Cys鉴定为NLRP3的新调节位点，并表明TA是一种有希望的用于治疗结肠炎的候选化合物。
DOI：10./j.bcp..
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